Инструкция по определению витамина C в пищевых продуктах № 4387-87

Утверждаю Заместитель начальника Главного санитарно-эпидемиологического управления Минздрава СССР А.И.ЗАИЧЕНКО 10 июля 1987 г. N 4387-87 ИНСТРУКЦИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ВИТАМИНА C В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ Разработана в Институте питания АМН СССР лабораторией витаминизации пищевых продуктов. Метод визуального титрования витамина С является наиболее простым доступным и широко используется как в нашей стране так и за рубежом для определения этого витамина в пищевых продуктах не содержащих естественных пигментов мешающих визуальному установлению конца титрования. Метод прошел широкую апробацию в различных лабораториях научных и практических учреждений лаборатории пищевых отделов СЭС кафедр гигиены питания медицинских институтов лабораторий различных отраслей пищевой промышленности одобрен Минздравом СССР и рекомендован для практического использования Междуведомственной комиссией по составлению "Таблиц химического состава пищевых продуктов". Принцип метода Метод основан на способности аскорбиновой кислоты АК окисляясь количественно восстанавливать 2 6-дихлорфенолиндофенолят натрия. АК экстрагируют раствором метафосфорной кислоты и титруют 2 6-дихлорфенолиндофенолятом натрия до установления светло-розовой окраски. Дегидроаскорбиновую кислоту в АК восстанавливают цистеином для отделения АК от редуцирующих соединений присутствующих в пищевых продуктах подвергающихся тепловой обработке и длительно хранившихся экстракты обрабатывают формальдегидом при определении pH. Оборудование Потенциометр; термостат водяной на 37 °С; весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г поверочной ценой деления не более 0 5 мг; весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 500 г поверочной ценой деления не более 50 мг; гомогенизатор. Посуда Ступка с пестиком; воронки фильтровальные диаметром 5 - 7 5 см; колбы мерные вместимостью 100 500 и 1000 куб. см; колбы конические вместимостью 50 и 100 куб. см; микробюретки на 2 куб. см с ценой деления 0 01 куб. см; пипетки градуированные на 1 2 5 и 10 куб. см; цилиндры мерные на 100 и 200 куб. см; стаканы на 50 и 100 куб. см. Реактивы 1. Аскорбиновая кислота Госфармакопея СССР X изд. ст. 6 . 2. 2 6-дихлорфенолиндофенолят натрия. 3. Калий фосфорнокислый двузамещенный. 4. Метафосфорная кислота. 5. Натрий уксуснокислый. 6. Серная кислота ос.ч. 7. Уксусная кислота ледяная. 8. L-цистеин HCl. 9. Формальдегид 36 - 38%. 10. Этилендиаминтетрауксусная кислота. 11. Бумага фильтровальная. Приготовление реактивов 1. Раствор метафосфорной кислоты 6% и 3%. Растирают в ступке 60 г HPO 3 и растворяют в 940 куб. см дистиллированной воды без нагревания. При стоянии раствор HPO медленно гидролизуется до H PO поэтому свежий 3 3 4 раствор готовят еженедельно. 3% раствор HPO готовят в день проведения анализа из 6% раствора. 3 2. Стандартные растворы аскорбиновой кислоты АК с массовой концентрацией 1 мг/куб. см и 0 1 мг/куб. см. Растворяют 0 1000 г АК в мерной колбе на 100 куб. см в 3% растворе метафосфорной кислоты и доводят тем же раствором кислоты до метки раствор с массовой концентрацией 1 мг/куб. см . Для приготовления раствора 0 1 мг/куб. см 10 куб. см раствора АК с концентрацией 1 мг/куб. см вносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят до метки 3% раствором метафосфорной кислоты. Растворы неустойчивы их приготовляют непосредственно перед применением. 3. Раствор 2 6-дихлорфенолиндофенолята натрия 0 04%. Растворяют 0 2 г 2 6-дихлорфенолиндофенолята натрия в 300 куб. см горячей свежекипяченой в течение 30 мин. дистиллированной воды фильтруют через складчатый фильтр в мерную колбу вместимостью 500 куб. см и промывают фильтр горячей водой. После охлаждения раствор доводят до метки охлажденной свежекипяченой дистиллированной водой. Срок годности раствора при хранении в холодильнике - не более 2 дней. Установка титра раствора 2 6-дихлорфенолиндофенолята натрия: в две конические колбы наливают по 9 куб. см 3% раствора метафосфорной кислоты и по 1 куб. см раствора АК с массовой долей 0 1 мг/куб. см и быстро титруют раствором 2 6-дихлорфенолиндофенолята натрия до светло-розовой окраски не исчезающей в течение 10 - 15 с. Таким же образом титруют 10 куб. см 3% раствора метафосфорной кислоты контроль на реактивы . Поправку к титру раствора вычисляют по формуле: Т = 0 10 / V - V 1 где: 0 10 - количество АК в 1 0 куб. см стандартного раствора мг; V - объем раствора 2 6-дихлорфенолиндофенола затраченный на титрование стандартного раствора АК куб. см; V - объем 2 6-дихлорфенолиндофенола затраченный на титрование 3% 1 раствора метафосфорной кислоты куб. см. 4. Раствор L-цистеина HCl с массовой концентрацией 50 мг/куб. см. Раствор приготовляют в день применения. 5. Ацетатный буфер рН - 4 0 . Растворяют 49 8 г уксуснокислого натрия в 70 куб. см дистиллированной воды и добавляя ледяную уксусную кислоту около 100 куб. см потенциометрически доводят рН до 4 0. 6. Раствор серной кислоты: к 50 куб. см дистиллированной воды осторожно добавляют 50 куб. см концентрированной серной кислоты. 7. Раствор этилендиаминтетрауксусной кислоты ЭДТА с массовой концентрацией 15%. 8. Раствор двузамещенного фосфорнокислого калия с массовой концентрацией 45%. Ход определения Интервал определяемых концентраций АК составляет 0 05 - 0 12 мг в объеме экстракта от 1 0 до 10 куб. см взятого на титрование. Величину навески продукта и последующее разведение рассчитывают исходя из интервала указанных концентраций. Навеску исследуемого материала взятую из средней пробы 1 - 50 г в зависимости от предполагаемого количества витамина С помещают в фарфоровый стакан в который налито 30 - 50 куб. см 6% HPO и 3 гомогенизируют полученный гомогенат включая мякоть количественно переносят в мерную колбу или цилиндр вместимостью 100 - 200 куб. см доводят до метки 3% HPO перемешивают и фильтруют через фильтровальную 3 бумагу. При анализе сухих продуктов гомогенат после измельчения настаивают в течение 10 - 15 мин. При определении витамина С в жидких объектах необходимое количество материала отсеивают или отмеряют в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят до метки 3% HPO . 3 Экстрагирование проводят быстро полученные экстракты сразу используют для анализа. При экстрагировании АК из продуктов расфасованных в металлическую тару или из продуктов с высоким содержанием железа навеску образца 1 - 25 г гомогенизируют в 6% раствора HPO переносят в цилиндр вместимостью 3 100 куб. см этим же раствором кислоты и доводят объем до 50 куб. см перемешивают. Через 10 мин. прибавляют 30 куб. см ацетатного буферного раствора и 10 куб. см раствора ЭДТА доводят до метки 3% раствором HPO 3 перемешивают и фильтруют. Определение АК В две конические колбы вносят пипеткой от 1 до 10 куб. см экстракта доводят объем 3% раствором HPO до 10 куб. см и титруют раствором 2 6- 3 дихлорфенолиндофенола до слабо-розового окрашивания не исчезающего в течение 10 - 15 с. Таким же образом титруют 10 куб. см 3% раствора HPO 3 контроль на реактивы - V . 0 При содержании в продукте редуцирующих соединений контрольное испытание проводят следующим образом: в коническую колбу помещают такой же объем экстракта как при определении АК прибавляют равный ему объем ацетатного буфера и раствор формальдегида в объеме равном половине объема буферного раствора перемешивают закрывают колбу пробкой оставляют на 10 мин. и титруют раствором 2 6-дихлорфенолиндофенола V . 0 Массовую долю АК в мг на 100 г продукта вычисляют по формуле: Т х V - V х V х 100 0 1 Х = ----------------------- 1 V х а 2 где: Т - титр раствора 2 6-дихлорфенолиндофенола; V - объем 2 6-дихлорфенолиндофенола израсходованного на титрование испытуемого раствора среднее из двух параллельных определений куб. см; V - объем раствора 2 6-дихлорфенолиндофенола израсходованного на 0 титрование при контрольном испытании куб. см; V - общий объем экстракта полученный при экстрагировании пробы куб. 1 см; V - объем экстракта взятый на титрование куб. см; 2 а - масса навески г; 100 - пересчет на 100 г продукта. Вычисление проводят до первого десятичного знака. За конечный результат принимают среднее арифметическое двух параллельных определений. Расхождение между двумя параллельными определениями не должно превышать 5% от среднего арифметического значения. Определение общего содержания витамина С аскорбиновая кислота + дегидроаскорбиновая кислота АК + ДАК В коническую колбу наливают 2 - 20 куб. см экстракта для проведения двух параллельных определений V доводят pH до 7 2 - 7 4 3 потенциометрически 45% раствором двузамещенного фосфорнокислого калия добавляют раствор цистеина в таком количестве чтобы его массовая концентрация приблизительно в 300 раз превышала предполагаемое содержание ДАК и ставят колбу в термостат при температуре 37 °С на 30 мин. Массовую долю цистеина в мг добавляемую к экстракту рассчитывают по формуле: К х а х V х 300 К х а х V х 3 3 3 Х = ---------------- = -------------- 2 100 х V V 1 1 где: К - массовая концентрация АК в продукте определенная по формуле 1 мг на 100 г продукта; V - объем экстракта взятый на восстановление ДАК в АК куб. см; 3 остальные обозначения те же что в формуле 1 . После термостатирования раствор быстро охлаждают до комнатной температуры доводят потенциометрически рН раствора до 0 - 0 5 раствором серной кислоты и измеряют объем V . К части раствора с примерной 4 массовой концентрацией АК 0 1 мг V прибавляют формальдегид до 2 получения массовой доли 3% закрывают колбу пробкой и через 8 мин. титруют раствором 2 6-дихлорфенолиндофенола до слабо-розового окрашивания не исчезающего в течение 10 - 15 с. Массовую долю витамина С в мг на 100 г продукта вычисляют по формуле: Т х V х V х V х 100 1 4 Х = --------------------- 3 V х V х а 2 3 где: V - объем раствора после доведения рН до 0 - 0 5 куб. см; 4 остальные обозначения те же что в формулах 1 и 2 . Вычисление проводят до первого десятичного знака. За результат принимают среднее арифметическое двух параллельных определений. Расхождение между двумя параллельными определениями не должно превышать 8% от среднего арифметического значения.