МУ 2458-81

МУ 2458-81 Временные методические указания по определению паарлана методом газожидкостной хроматографии в почве, табаке и в табачном дыме

Утверждаю Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР А.И.ЗАИЧЕНКО 22 октября 1981 г. N 2458-81 ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПААРЛАНА МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ В ПОЧВЕ ТАБАКЕ И В ТАБАЧНОМ ДЫМЕ Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР а также ветеринарных агрохимических контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания кормах и внешней среде. Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов. Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями болезнями растений и сорняками при МСХ. Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР. 1. Краткая характеристика пестицида Паарлан изопропалин BSA WSSA EL 2 179 - NN-ди- н-пропил -2 6-динитро-4-изопропиланилин - маслянистая жидкость красно-оранжевого цвета является производным 2 6-динитроанилина. Структурная формула: NO ¦ 2 --- CH CH // \\ N[CH CH ] 3 2 \ / 3 2 --- ¦ NO 2 Эмпирическая формула: C H O N . М.м. 309 37. 15 23 4 3 Температура кипения 128 °С при 1 мм рт. ст. -5 Давление паров 1 45 х 10 мм рт. ст. при 30 °С. При комнатной температуре хорошо растворим в большинстве органических растворителей ацетоне бензоле спирте хлороформе и др. . Растворимость в воде при 25 °С менее 0 5 мг/л. По существующим в СССР методам оценки токсичности химических препаратов паарлан относится к малотоксичным препаратам ЛД - 7500 мг/кг. 50 Препарат выпускается в виде концентрата эмульсии содержащей 68 8% действующего вещества. Как селективный почвенный гербицид рекомендован для борьбы с сорной растительностью на табаке и других растениях вида Solanecca. 2. Методика определения паарлана методом газожидкостной хроматографии 2.1.1. Принцип метода Метод основан на газохроматографическом определении паарлана с детектором по захвату электронов на неподвижной фазе SE-30 после экстракции этиловым спиртом жидкостного перераспределения в системе этиловый спирт - вода - гексан и очистки на колонке с силикагелем. 2.1.2. Метрологическая характеристика метода Минимально детектируемое количество паарлана - 0 3 нг. Диапазон определяемых концентраций: почва - 0 04 - 1 3 мг/кг; зеленая масса - 0 07 - 2 3 мг/кг; высушенный табачный лист - 0 05 - 1 3 мг/кг; табачный дым - 0 05 - 1 3 мг/кг. Предел обнаружения: в почве - 0 04 мг/кг; зеленом табаке - 0 07 мг/кг; в сухом табаке и табачном дыме - 0 05 мг/кг. Результаты определения заданных количеств паарлана в почве табаке и табачном дыме приведены в таблице 1. Таблица 1 МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПААРЛАНА В ПОЧВЕ ТАБАКЕ И В ТАБАЧНОМ ДЫМЕ МЕТОДОМ ГЖХ ------------T----------T-------------T-------T------------T-----------T-----------T-------T-------------¬ ¦Исследуемый¦ К-во ¦ К-во ¦Процент¦ Число ¦Стандартное¦ Относит. ¦Среднее¦Доверительный¦ ¦ материал ¦паарлана ¦ паарлана ¦опреде-¦параллельных¦отклонение ¦стандартное¦откло- ¦ интервал ¦ ¦ ¦внесенного¦обнаруженного¦ления ¦определений ¦ S ¦отклонение ¦нение ¦ среднего ¦ ¦ ¦ в пробу ¦ в пробе ¦% ¦ n ¦ ¦ S % ¦ ¦при Р = 0 95 ¦ ¦ ¦ мг/кг ¦ мг/кг ¦ ¦ ¦ ¦ r ¦d ¦ n = 5 ¦ +-----------+----------+-------------+-------+------------+-----------+-----------+-------+-------------+ ¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦ 6 ¦ 7 ¦ 8 ¦ 9 ¦ +-----------+----------+-------------+-------+------------+-----------+-----------+-------+-------------+ ¦почва ¦0 08 ¦0 071 ¦89 ¦5 ¦0 0022 ¦3 1 ¦0 0016 ¦0 003 ¦ ¦почва ¦0 4 ¦0 37 ¦92 5 ¦5 ¦0 014 ¦3 78 ¦0 012 ¦0 02 ¦ ¦почва ¦1 3 ¦1 17 ¦90 3 ¦5 ¦0 02 ¦1 71 ¦0 016 ¦0 025 ¦ ¦зеленый ¦0 14 ¦0 098 ¦70 ¦5 ¦0 0022 ¦2 25 ¦0 0022 ¦0 003 ¦ ¦лист ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦зеленый ¦0 4 ¦0 286 ¦71 5 ¦5 ¦0 0014 ¦0 5 ¦0 0012 ¦0 002 ¦ ¦лист ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦зеленый ¦1 3 ¦0 92 ¦70 8 ¦5 ¦0 026 ¦2 83 ¦0 02 ¦0 033 ¦ ¦лист ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦сухой лист ¦0 1 ¦0 081 ¦81 ¦5 ¦0 00224 ¦2 76 ¦0 0016 ¦0 003 ¦ ¦сухой лист ¦0 4 ¦0 348 ¦87 ¦5 ¦0 0045 ¦1 29 ¦0 004 ¦0 006 ¦ ¦сухой лист ¦1 3 ¦1 125 ¦86 5 ¦5 ¦0 0062 ¦0 55 ¦0 0048 ¦0 008 ¦ ¦табачный ¦0 1 ¦0 086 ¦86 ¦5 ¦0 0029 ¦3 4 ¦0 0024 ¦0 004 ¦ ¦дым ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦табачный ¦0 4 ¦0 361 ¦90 2 ¦5 ¦0 0024 ¦0 6 ¦0 0018 ¦0 003 ¦ ¦дым ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦табачный ¦1 3 ¦1 170 ¦90 5 ¦5 ¦0 039 ¦3 3 ¦0 0033 ¦0 048 ¦ ¦дым ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ L-----------+----------+-------------+-------+------------+-----------+-----------+-------+-------------- 2.2. Реактивы и материалы Этиловый спирт осч ТУ 1911-3969 н-Гексан хч МРТУ 6-09-2937-66 Натрий сернокислый безводный хч ГОСТ 4166-76 Натрий хлористый хч ГОСТ 4233-77 Силикагель Л 0 1/0 2 мм ЧССР с 20% H O 2 Стандартный раствор паарлана в гексане конц. 0 004 мг/мл 5-процентный водный раствор хлористого натрия. 2.3. Приборы и посуда Микрошприц на 10 мкл МШ-10 Ротационный вакуум-испаритель ИР-IМ ТУ 25-11-917-74 Гомогенизатор Курительная машина фирмы "Боргвальд" ФРГ Аппарат для встряхивания ТУ 64-1-2451-78 Весы аналитические ВЛР-200 ТУ 25-06-1131-75 Колбы конические со шлифом на 250 мл ГОСТ 10394-72 тип ПКШ Колба Бунзена ГОСТ 6514-75 Воронка Бюхнера ГОСТ 9147-73 Хроматографические колонки диам. 20 мм с пористой стеклянной пластинкой Цилиндры мерные на 50 и 100 мл ГОСТ 1770-74 Воронки делительные на 500 мл ГОСТ 8613-75 Колбы конические на 250 мл ГОСТ 10394-72 тип II Колбы круглодонные на 100 мл ГОСТ 10394-72 тип КККШ Воронки химические разные ГОСТ 8613-75 тип 1а Пипетки разные ГОСТ 20292-74 Фильтры бумажные ТУ 6-09-1678-77 Вата обезжиренная. 2.4. Подготовка к определению 2.4.1. Установление линейного динамического диапазона Готовят эталонный раствор паарлана в гексане содержащий 0 03 мг паарлана в 1 мл раствора. В 10 колб емкостью по 100 мл вносят пипеткой 1 2 3 4 5 6 7 8 9 и 10 мл эталонного раствора доводят до метки гексаном перемешивают. Полученные растворы с концентрацией 0 0003 0 0006 0 0009 0 0012 0 0015 0 0018 0 0024 0 0027 и 0 003 мг/мл поочередно вводят в хроматограф по 5 мкл. 2.4.2. Приготовление силикагеля для колоночной хроматографии Силикагель марки Л 0 1/0 2 мм ЧССР перед употреблением высушивают в течение 4 часов при температуре 140 °С и переносят в склянку с притертой пробкой. К остывшему силикагелю осторожно при перемешивании приливают небольшими порциями дистиллированную воду из расчета 20 мл на 80 г силикагеля тщательно перемешивают встряхиванием до исчезновения комочков и оставляют на 24 часа для равномерного распределения воды. Проверяют активность каждой вновь приготовленной порции силикагеля. 2.4.3. Отбор хранение и доставка проб Отбор и хранение проб почвы и табака производят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб..." утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР А.И. Заиченко за N 2051-79 от 21 августа 1979 г. Для анализа табачного дыма используют сигареты отобранные по весу сопротивлению затяжке и кондиционированные по влажности. Для кондиционирования по влажности сигареты без упаковки оставляют на 3 - 5 суток в эксикаторе при 22 +/- 2 °С над 38-процентной серной кислотой весов. % создающей относительную влажность воздуха 60 8%. После предварительного кондиционирования определяют среднюю массу сигарет а затем отбирают их по массе и сопротивлению затяжке. Для определения среднего веса сигарет определяют общий вес 200 - 300 сигарет и вычисляют среднюю массу сигареты. Сигареты с явными дефектами замасленные рваные со слабой и неравномерной плотностью набивки с наличием осыпки табака и др. отбрасывают. При отборе сигарет взвешивают на аналитических весах каждую сигарету и отбирают только те масса которых не отклоняется более чем на +/- 20 мг от средней массы сигареты. В отобранных по массе сигаретах определяют сопротивление затяжке в 30 сигаретах и вычисляют среднее. Измеряют сопротивление затяжке всех отобранных по массе сигарет и отбирают только те которые по сопротивлению затяжке не отклоняются более чем на +/- 5 мм водяного столба от среднего сопротивления затяжке. Стандартная длина окурка для сигарет без фильтра 7 мм. Метку на сигарете делают мягким графитовым карандашом. До прокуривания на курительной машине сигареты отобранные по весу и сопротивлению затяжке хранят в эксикаторе при условиях указанных выше. Перед машинным курением сигарет определяют влажность табака. Прокуривание сигарет проводят при стандартных условиях курения: объем затяжки 35 мл; продолжительность затяжки 2 сек.; пауза 58 сек. Определяют общую массу 10 сигарет вставляют их в гнезда курительной машины и проводят прокуривание при указанных выше условиях. Конденсат дыма 10 сигарет собирают в электростатическую ловушку под воздействием высокого напряжения происходит электростатическое осаждение дыма в ловушке . По окончании прокуривания определяют массу окурков. 2.5. Проведение определения 2.5.1. Экстракция и очистка экстракта Почва. Измельченный почвенный образец 20 - 50 г помещают в коническую колбу емкостью 250 мл заливают 80 мл этилового спирта и экстрагируют встряхиванием 30 мин. Экстракт фильтруют в колбу Бунзена с воронкой Бюхнера под вакуумом. Остаток на фильтре промывают 20 мл спирта и переносят в делительную воронку. К экстракту добавляют 150 мл 5-процентного водного раствора поваренной соли и извлекают паарлан трехкратным встряхиванием с 20 мл гексана. Объединенные гексановые экстракты сушат безводным сульфатом натрия упаривают до 2 - 5 мл и количественно переносят в градуированную пробирку на 5 - 10 мл. При необходимости упаренный гексановый экстракт очищают на колонке с силикагелем. Табак. Навеску образца зеленых листьев табака 50 г гомогенизируют 5 мин. при 8000 об./мин. со 150 мл 80% этанола. Гомогенат фильтруют под вакуумом через воронку Бюхнера и остаток на фильтре промывают 30 мл 80% этанола. Спиртовой экстракт переносят в делительную воронку на 500 мл приливают 100 мл 5-процентного водного раствора хлористого натрия и экстрагируют 3 х 20 мл гексана. Объединенные гексановые экстракты упаривают до 5 мл. Готовят хроматографическую колонку с 12 г силикагеля промывают ее 40 мл гексана и вносят упаренный табачный экстракт. Колбу промывают 3 х 5 мл гексана и каждый новый объем вносят в колонку после того как мениск предыдущего объема раствора достигнет поверхности силикагеля. Паарлан элюируют гексаном. Скорость прохождения растворителя через колонку устанавливают 2 капли в секунду. Первые 100 мл гексана прошедшие через колонку отбрасывают а последующие 150 мл собирают упаривают до 1 - 2 мл переносят гексаном в градуированную пробирку и аликвоты по 4 - 6 мкл вводят в хроматограф. При анализе образцов высушенного табака извлечение паарлана проводится гомогенизированием 20 г табака с 80 мл этилового спирта. Дальнейшее определение проводится так же как и в зеленом табаке. Табачный дым. Конденсат табачного дыма собранный в электростатической ловушке смывают 50 мл этанола в делительную воронку добавляют 100 мл 5-процентного раствора хлорида натрия и экстрагируют 3 х 20 мл гексана в течение 2 мин. Объединенные гексановые экстракты обезвоживают сернокислым натрием упаривают до 5 мл и очищают на колонке с силикагелем как указано при анализе табака. Собранный элюат упаривают до 2 мл переносят в градуированную пробирку на 5 - 10 мл и аликвоты по 4 - 6 мкл вводят в хроматограф. 2.5.2. Условия хроматографирования Газовый хроматограф с детектором по захвату электронов. Колонка хроматографическая стеклянная размером 1800 х 3 мм. Набивка - Хезасорб 0 25 - 0 30 мм силанизированный ГМДС покрытый метилсилоксаном SE-30 5% . Температурный режим колонки - 210 °С детектора - 278 °С испарителя - 250 °С. Скорость газа-носителя азот - 65 мл/мин. продувочного азот - 120 мл/мин. -10 Рабочая шкала электрометра 2 5 х 10 А. Напряжение ионизации 120 В. Скорость протяжки ленты самописца - 1 5 см/мин. Время удерживания паарлана при этих условиях - 8 5 мин. В испаритель вводят 6 мкл рабочего раствора в гексане. 2.6. Обработка результатов анализа Количественное определение проводят путем сравнения высот пиков стандартного и исследуемого растворов. Линейность детектирования соблюдается в пределах 0 3 - 10 нг. Содержание остаточных количеств паарлана в анализируемой пробе вычисляют как среднее из трех параллельных определений. Расчет производится по формуле: а х H х V х V х 100 х ст о Х = ------------------------ H х V х G х 100 - W ст х где: Х - количество паарлана в анализируемой пробе мг/кг ; а - концентрация стандартного раствора паарлана мг/мл ; H - высота хроматографического пика исследуемого раствора мм ; х H - высота хроматографического пика стандартного раствора мм ; ст V - объем пробы введенный в хроматограф мкл ; х V - объем стандартного раствора мкл ; ст V - общий объем исследуемого раствора мл ; о G - навеска образца кг ; W - влажность анализируемой пробы % . При анализе табачного дыма G определяется как разность между массой сигарет до и после прокуривания и величина Х выражается в мг/кг сгоревшего абсолютно сухого табака. 2.7. Требования безопасности Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами. 3. Методические указания разработаны Всесоюзный научно-исследовательский институт табака и махорки им. А.И. Микояна НПО "Табак" .