Методические указания по определению токсичности зерновых культур и продуктов их переработки, пораженных грибами рода фузариум секции Sporotrichiella

Утверждаю Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР В.Е.КОВШИЛО 23 марта 1978 г. N 1829-78 МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТОКСИЧНОСТИ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР И ПРОДУКТОВ ИХ ПЕРЕРАБОТКИ ПОРАЖЕННЫХ ГРИБАМИ РОДА ФУЗАРИУМ СЕКЦИИ SPOROTRICHIELLA Методические указания подготовлены Институтом питания АМН СССР и Оренбургским медицинским институтом. Методические указания рекомендуются для использования в работе лабораторий санэпидстанций. В зерновых культурах убранных или произраставших в неблагоприятных метеорологических условиях обильные дожди ранний снег запоздалой уборки урожая поздно осенью вывезенных с поля а также своевременно убранных но недостаточно просушенных или хранившихся в условиях повышенной влажности может отмечаться повышенная их пораженность токсигенными микроскопическими грибами из рода Фузариум и вследствие этого зерно приобретает ядовитые свойства. Продукты жизнедеятельности этих грибов не теряют своих свойств при термической обработке: выпечке хлеба варке пищи и т.д. Поэтому употребление в пищу такого зерна и продуктов его переработки может стать причиной в некоторых случаях протекающих очень тяжело заболеваний людей алиментарно-токсическая алейкия расстройства функции кишечного тракта и др. . В последние годы в урожае хлебов иногда обнаруживают зерна с розовым и красным оттенками особенно в зерне ржи имеющие внешние признаки характерные для зерна пораженного Фузариум. Однако следует иметь в виду что окраска зерна не всегда связана с его токсичностью. Такое зерно является лишь "подозрительным" на токсичность. С целью профилактики зерновых пищевых микотоксикозов людей зерно подозрительное по вышеуказанным показателям должно исследоваться на токсичность биологическими методами. Обязательным является испытание зерна на голубях. Биопроба с культурой дрожжей желательна в качестве подтверждающего теста. I. Материал для исследования Исследованию подлежат: 1. Зерно нормальных сроков уборки но имеющее окрашенные в розовый или красный цвет зерна что вызывает подозрение на обсеменение их микроскопическими грибами из рода Фузариум а также продукты переработки такого зерна. 2. Зерно нормальных сроков уборки но хранившееся при неблагоприятных условиях имеющее следы плесневения подозрительное при визуальном осмотре а также продукты переработки такого зерна. II. Отбор зерна и его паспортизация Пробы отбираются от каждой поступающей партии зерна в соответствии с ГОСТом 3040-55. Отобранные образцы должны быть паспортизованы. На этикетках указывается: а место отбора зерна область район колхоз совхоз и т.д. ; б наименование зерновой культуры пшеница рожь просо и др. ; в количество зерна от которого взята проба или размер партии ; г откуда взят образец снят на корню из валков со склада ; д дата отбора пробы; е вес взятого образца; ж фамилия ответственного за отбор проб. Отобранные образцы направляют на исследование в ближайшую санитарно-эпидемиологическую станцию. III. Подготовка материала для исследования и получение экстракта липидов Из поступившего на исследование зерна отбирают среднюю пробу около 200 г подсушивают ее при температуре 40 - 50° из них 100 г измельчают на лабораторной мельнице в течение двух минут и экстрагируют диэтиловым эфиром в аппарате Соколета в течение 6 часов. Эфирный экстракт высушивают безводным сернокислым натрием отфильтровывают и эфир отгоняют на водной бане при температуре не выше 40 - 50 °C. Полученный масляный остаток - свободные липиды - используют для определения токсичности. В каждом случае при проведении анализа необходимо ставить контрольную пробу с доброкачественным зерном. IV. Биологическая проба на голубях В качестве тест-объекта используют голубей породы "Сизарь" в количестве не менее трех птиц на каждый образец зерна. Кормление голубей проводят испытуемым зерном натощак из расчета 5 г зерна на 1 кг веса птицы в течение 14 дней кормят из чайной ложки насильственно открывая клюв . После кормления ставят в клетку воду а через 2 часа обязательно обычный корм <*>. -------------------------------- <*> Нормы питания голубей: 1. Вика - 30% 2. Горох - 20% 3. Ячмень - 10% 4. Просо - 20% 5. Пшеница - 15% 6. Конопля - 5% ----------------- 40 г При отсутствии указанных ингредиентов можно использовать следующие: 1. Пшено - 20 г 2. Семечки - 10 г 3. Конопля - 5 г 4. Пшеница - 5 г ----------------- 40 г Каждый голубь содержится в отдельной клетке на дно которой стелится светлая бумага чтобы не пропустить выделения рвотных масс и наличия жидкого стула. В течение опыта следят за общим состоянием и весом птицы. При отсутствии положительной реакции голубей в течение опытного периода птиц забивают методом декапитации и производят макро- и микроскопические изучения органов тканей слизистых оболочек клюва гортани пищевода желудочно-кишечного тракта обращая особое внимание на состояние печени почек селезенки . При наличии симптомов заболевания голубей рвота понос или гибели испытуемое зерно оценивается как токсичное. При отсутствии клинической картины заключение о зерне дают уже по патоморфологическим данным исключая интеркурентные заболевания. V. Определение токсичности зерна при помощи чувствительного к фузариотоксину штамма дрожжей Saccharomyces fragilis 25Д ориентировочный метод В качестве тест-организма для определения фузариотоксинов этот штамм дрожжей был предложен Институтом микробиологии и вирусологии им. Д.К. Заболотного АН УССР. Для анализа используют 24-часовую культуру дрожжей на сусловом агаре. В пробирку с культурой дрожжей наливают 5 - 10 мл стерильной водопроводной воды. Пробирку взбалтывают до образования суспензии. Суспензию готовят по эталону N 5 что соответствует 5 единицам мутности 0 5 млрд./1 мл стандарта мутности. 1 - 2 мл суспензии наливают в заранее приготовленные чашки Петри и заливают расплавленным и охлажденным до 60° сусло-агаром из расчета 20 мл на чашку и тщательно перемешивают. На застывшую поверхность среды помещают стерильные диски вырезанные из фильтровальной бумаги диаметром 5 мм на которые наносят 0 01 мл липидов выделенных из исследуемого зерна. Чашки Петри помещают в термостат при температуре 35 °C на сутки после чего определяют результаты опыта. Степень токсичности липидов определяют по диаметру стерильных зон: диаметр стерильной зоны до 15 мм - зерно слаботоксичное; 15 - 25 мм - среднетоксичное; выше 25 мм - резкотоксичное; контроль - отсутствие стерильных зон. VI. Заключение по результатам исследования образца зерна Заключение о пригодности исследуемого образца зерна в питании дается на основании результатов биологических проб на голубях и дрожжевых грибах. 1. Отсутствие клинической картины заболевания у голубей и отсутствие зон задержки роста дрожжей на чашках Петри - зерно нетоксичное. 2. Наличие симптомов заболевания у голубей и наличие задержки роста дрожжей - зерно токсичное. 3. Наличие симптомов заболевания у голубей при отсутствии зон задержки роста дрожжей - зерно токсичное. 4. Отсутствие симптомов заболевания у голубей но наличие зон задержки роста дрожжей - зерно сомнительное. Необходимо повторить исследования с новой пробой зерна данного образца. Настоящие методические указания издаются временно сроком на 2 года взамен "Методических указаний по определению токсичности зерновых культур и продуктов их переработки в связи с поражением их токсигенными грибами Фузариум" утвержденных заместителем Главного санитарного врача СССР от 12.01.1967 за N 661-67.