МУ 2142-80

МУ 2142-80 Методические указания по определению хлорорганических пестицидов в воде, продуктах питания, кормах и табачных изделиях хроматографией в тонком слое

Методические указания по определению хлорорганических пестицидов в воде продуктах питания кормах и табачных изделиях хроматографией в тонком слое Утв. Главным государственным санитарным врачом СССР 28 января 1980 г. N 2142-80 Настоящие Методические указания распространяются на определение содержания ДДТ ДДЭ ДДД гексохлорана алдрина кельтана гептахлора метоксихлора дактала тедиона и эфирсульфоната в воде почве вине овощах фруктах грибах зерне комбикормах корнеклубнеплодах и зеленых кормах рыбе мясе мясопродуктах внутренних органах молоке и молочных продуктах животном жире сливочном и растительных маслах жмыхах шпротах лузге меде сахаре яйцах и яйцепродуктах а также в табачных изделиях. I. Характеристика анализируемых пестицидов Краткая характеристика препаратов представлена в табл. 1. 2.1. Принцип метода. Метод основан на хроматографии хлорсодержащих пестицидов в тонком слое окиси алюминия силикагеля или пластинок "Силуфол" в различных системах подвижных растворителей после экстракции их из исследуемых образцов и очистке экстрактов. Подвижным растворителем служит н-гексан или н-гексан в смеси с ацетоном. Таблица 1 Физико-химические свойства пестицидов ------T---------------T---------------T--------------T---------T------------------T-------------------------¬ ¦ N  ¦ Пестицид ¦ Химическое ¦ Эмпирическая ¦ Мол. ¦ Темп.°С ¦ Растворимость ¦ ¦ пп ¦ ¦ название ¦ формула ¦ масса ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +----------T-------+---------T---------------+ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦плавления ¦ кип ¦ в воде ¦в орг. растворе¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ мм: ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦рт.ст. ¦ ¦ ¦ +-----+---------------+---------------+--------------+---------+----------+-------+---------+---------------+ ¦ 1. ¦Альдрин ¦1 2 3 4 10 ¦ С12Н8CI6 ¦ 364 92 ¦104 - 105 ¦ ¦ н ¦гексан бензол ¦ ¦ ¦ ¦10-гексахлор-1 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ацетон спирты ¦ ¦ ¦ ¦4-эндо-5 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ и др. ¦ ¦ ¦ ¦8-экзо-димети- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦лен-1 4 4а ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦5 8 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦8а-гексагидро- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦нафталин ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +-----+---------------+---------------+--------------+---------+----------+-------+---------+---------------+ ¦ 2. ¦Гексахлоран ¦1 2 3 4 5 ¦ С6Н6Сl6 ¦ 290 82 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦6-гексахлорцик-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦логексан ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +-----+---------------+---------------+--------------+---------+----------+-------+---------+---------------+ ¦ 3. ¦Гексахлорбензол¦1 2 3 4 5 ¦ С6Сl6 ¦ 264 8 ¦ 231 ¦ 322 ¦ тр-р ¦бензол спирты ¦ ¦ ¦ ¦6-гексахлорбен-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦четыреххлорист.¦ ¦ ¦ ¦зол ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ углерод ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ керосин ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ бензол. ¦ +-----+---------------+---------------+--------------+---------+----------+-------+---------+---------------+ ¦ 4. ¦Гептахлор ¦1 4 5 6 7 ¦ С10Р5CI7 ¦ 373 5 ¦ 95 - 96 ¦ 117 - ¦ н ¦ циклогексан ¦ ¦ ¦ ¦8-гептахлор-4 ¦ ¦ ¦ ¦ 196 ¦ ¦ ксилол ¦ ¦ ¦ ¦7-эндо-метилен-¦ ¦ ¦ ¦ 0 05 ¦ ¦ четыреххлор. ¦ ¦ ¦ ¦3а 4 7 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ углерод ¦ ¦ ¦ ¦7а-тетрагидрои-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦керосин бензол¦ ¦ ¦ ¦нден ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +-----+---------------+---------------+--------------+---------+----------+-------+---------+---------------+ ¦ 5. ¦п.п' ДДД ¦4 4' -¦ С14Н10CI4 ¦ 320 0 ¦ 112 ¦ ¦ н ¦ацетон бензол ¦ ¦ ¦ ¦дихлордифенилх-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ гексан и др. ¦ ¦ ¦ ¦лорметилметан ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +-----+---------------+---------------+--------------+---------+----------+-------+---------+---------------+ ¦ 6. ¦п.п' ДДТ ¦4 4' -¦ С14Н9CI5 ¦ 354 5 ¦ 108 5 - ¦185 1 ¦ 0 001 ¦ацетон бензол ¦ ¦ ¦ ¦дихлордифенилт-¦ ¦ ¦ 109 ¦ ¦ ¦гексан спирты ¦ ¦ ¦ ¦рихлорметилме- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ и др. ¦ ¦ ¦ ¦тан ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +-----+---------------+---------------+--------------+---------+----------+-------+---------+---------------+ ¦ 7. ¦п.п' ДДЭ ¦4 ¦ С14Н9CI4 ¦ 318 0 ¦ ¦ ¦ 0 014 ¦ацетон гексан ¦ ¦ ¦ ¦4-дихлордифени-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ бензол ¦ ¦ ¦ ¦лдихлорэтилен- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +-----+---------------+---------------+--------------+---------+----------+-------+---------+---------------+ ¦ 8. ¦Дактал ¦Диметилтетрах- ¦ C10H6О4CI4 ¦ 332 0 ¦ 156 ¦ ¦ ¦ацетон гексан ¦ ¦ ¦ ¦лортерефталат ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ бензол ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ хлороформ. ¦ +-----+---------------+---------------+--------------+---------+----------+-------+---------+---------------+ ¦ 9. ¦Кельтан ¦4 4' -¦ С14Н9ОCI5 ¦ 370 4 ¦78 5 - 79 ¦ 225 ¦ н ¦ Толуол ¦ ¦ ¦ Хлорэтанол ¦дихлордифенилт-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ хлороформ ¦ ¦ ¦Кетан ¦рихлорметилкар-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ серный эфир ¦ ¦ ¦ ¦бинол ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦гексан бензол ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ спирты ¦ +-----+---------------+---------------+--------------+---------+----------+-------+---------+---------------+ ¦ 10. ¦Метоксихлор ¦4 4' -¦ C16H15O2CI3 ¦ 345 65 ¦ 70 - 85 ¦ ¦ тр-р ¦ ацетон ¦ ¦ ¦ ¦диметоксидифе- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦четыреххлор ис-¦ ¦ ¦ ¦нилтрихлорметил¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ тый углерод ¦ ¦ ¦ ¦метан ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ хлороформ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ бензол и др. ¦ +-----+---------------+---------------+--------------+---------+----------+-------+---------+---------------+ ¦ 11. ¦Тедион ¦4-Хлорфенил -¦ C12H6O2CI4S ¦ 356 07 ¦ 146-147 ¦ ¦0 02 56 ¦бензол ксилол ¦ ¦ ¦ ¦2 4 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ толуол ¦ ¦ ¦ ¦5-трихлорфенил-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ хлороформ ¦ ¦ ¦ ¦сульфон ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +-----+---------------+---------------+--------------+---------+----------+-------+---------+---------------+ ¦ 12. ¦Эфирсульфонат ¦4-хлорфенил -¦ C12H8CI2SO3 ¦ 303 06 ¦ 86 5 ¦ ¦ н ¦ ацетон ¦ ¦ ¦ ¦4-хлорбензол ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ дихлорэтан ¦ ¦ ¦ ¦сульфонат ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ксилол ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ циклогексан ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦четыреххлорис- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ тый углерод ¦ L-----+---------------+---------------+--------------+---------+----------+-------+---------+---------------- Места локализации препаратов обнаруживают после опрыскивания пластинок раствором аммиаката серебра с последующим ультрафиолетовым облучением или после облучения ультрафиолетовым светом пластинок "Силуфол" содержащих о-толидин. 2.2. Метрологическая характеристика метода. Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 2. 2.3. Реактивы и растворы Ацетон хч ГОСТ 2603-71 Аммиак водный хч ГОСТ 3760-64 Алюминия окись 2 ст. активности для хроматографии ч МРТУ 6-09-5296-68. Просеивают через сито 100 меш. Алюминия окись пропитанная серной кислотой. Две весовые части окиси алюминия или окиси кремния помещают в фарфоровую ступку заливают одной объемной частью серной кислоты и тщательно перемешивают. Смесь готовят непосредственно перед подготовкой колонок для очистки экстрактов из проб шротов жмыха лузги. Бензол хч ГОСТ 5955-68. Н-гексан ч МРТУ 6-09-2937-66 Калий щавелевокислый чда ГОСТ 5868-68 Кальций сернокислый чда ГОСТ 3210-66. Просушивают 6 часов в сушильном шкафу при 160°С. Просеивают через сито 100 меш. Кремния окись для люминофоров ч МРТУ 6-09-4875-67 Натрий сернокислый безводный ч ГОСТ 4166-66 Натрий углекислый кислый хч ГОСТ 4201-66 0 5 н. раствор Натрий хлористый хч. ГОСТ 4233-66 насыщенный раствор Петролейный эфир темп. кип. 40 - 70° Перекись водорода хч 30% водный раствор ГОСТ 10929-64 Проявляющие реактивы: Проявляющий реактив N 1. 0 5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды прибавляют 7 мл аммиака и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном: в готовый раствор можно добавить 0 2 мл перекиси водорода. Раствор следует хранить в колбе с притертой пробкой в темном месте в течение 3-х дней. На пластинку 9 х 12 см расходуется 8 - 10 мл раствора. Таблица 2 Метрологическая характеристика метода определения хлорорганических пестицидов Диапазон определяемых концентраций 0 005 - 2 0 мг/кг или мг/л -----------------------T-----------T----------T----------T-----------T----------T----------T----------- Анализируемая проба ¦ Предел ¦ Число ¦ Размах ¦ Среднее ¦Стандарт- ¦Относите- ¦Доверите- ¦обнаружения¦параллель-¦варьирова-¦ значение ¦ ное ¦ льное ¦ льный ¦ мг/л или ¦ ных ¦ ния % ¦определения¦отклонение¦стандарт- ¦ интервал ¦ мг/кг ¦определе- ¦ ¦ % ¦ % ¦ ное ¦ ¦ ¦ ний ¦ ¦ ¦ ¦отклонение¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ % ¦ -----------------------+-----------+----------+----------+-----------+----------+----------+----------- Вода 0 005 7 20 93 10 10 7 7 7 Вино 0 005 7 25 90 12 13 3 9 0 Овощи 0 05 7 20 83 12 14 4 9 0 Фрукты 0 05 6 20 81 9 11 1 7 4 Зерно 0 05 7 25 75 10 13 3 7 5 Трава 0 025 10 30 74 12 16 2 7 6 Рыба 0 05 10 24 83 12 14 4 7 6 Мясо 0 05 10 30 87 15 17 2 9 5 Животный жир 0 04 6 26 82 12 14 6 9 9 Молоко сливки творог 0 04 13 30 86 16 18 6 8 9 Сливочное масло 0 05 8 30 83 17 20 0 12 0 Сахар 0 02 6 6 97 5 5 1 4 1 Почва 0 06 70 9 7 9 Проявляющий реактив N 2. 0 5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды добавляют 10 мл 2-феноксиэтанола и доводят объем раствора до 200 мл ацетоном затем добавляют 6 капель 30%-ной перекиси водорода. Серебро азотнокислое чда ГОСТ 1277-63 Серная кислота ч ГОСТ 4204-66 Силикагель АСК Воскресенского химкомбината Московской обл. Силикагель КCK просеянный через сито 100 меш. Стандартные образцы: ДДТ ДДД ДДЭ алдрин изомеры ГХЦГ гептахлор метоксихлор кельтан эфирсульфонат дактал тедион хч. Стандартные растворы: 10 мг соответствующего пестицида растворяют в мерной колбе на 100 мл в н-гексане и доводят до метки этим растворителем. Стандартные растворы необходимо хранить в стеклянной посуде с притертыми пробками в холодильнике. Стеклянная вата очищенная конц. серной кислотой промытая дистиллированной водой и высушенная. о-Толидин ч МРТУ 6-09-6337-69 1% paствор в ацетоне. 2-фенокспэтанол Этиловый спирт ректификат - ТУ 19-II-39-69 Хлороформ хч ГОСТ 200-15-74 Четыреххлористый углерод хч ГОСТ 20228-74 Этиловый эфир для наркоза Фармокопея СССР Натрий сернокислый 2% водный раствор Натрий сернокислый насыщенный раствор 2.4. Приборы и посуда Баня водяная ТУ 64-I-2850-76 Вакуумно-ротационный испаритель ИР ТУ 25-II-310-69 или прибор для отгонки растворителей МРТУ 22-II-67-67 Воронки химические диам. 6 см ГОСТ 86-13-64 Воронки делительные емкостью 100 250 500 мл ГОСТ 10054-75 Воронки Бюмнера ГОСТ 9147-69 Гомогенизатор или измельчитель тканей Камера для опрыскивания ТУ 25-II-430-70 Камера для хроматографирования размером 150 х 200 105 х 165 мм ГОСТ 10565-63 Колбы Бунзена ТУ 25-II-135-69 Колбы мерные емкостью 50 100 мл ГОСТ 1770-74 Колбы нш емкость 100 250 500 мл ГОСТ 10394-63 Колбы круглодонные нш емкостью 150 250 500 мл ГОСТ 10394-63 Микропипетки ГОСТ 1770-74 для нанесения стандартных растворов Пипетки или шприцы для нанесения проб Пипетки емкостью 1 5 10 мл ГОСТ 1770-74 Прибор для встряхивания МРТУ 2451-64 Пластинки стеклянные 9 х 12 13 х 18 см Пульверизаторы стеклянные для опрыскивания пластинок Сито на 100 меш диаметр отверстий 0 147 мм Стеклянные хроматографические колонки диаметр-высота 20 х 400 15 х 150 Ртутно-кварцевая лампа Цилиндры мерные емкостью 25 50 100 250 500 мл ГОСТ 1770-74 Чашки выпарительные N 3 N 1 ГОСТ 9147-69 Приготовление пластинок для хроматографии Тщательно промытую хромовой смесью раствором соды дистиллированной водой и высушенную пластинку протирают этиловым спиртом или эфиром и покрывают сорбционной массой. Массу готовят следующим образом: а 50 г просеянной через сито 100 меш окиси алюминия смешивают в фарфоровой ступке с 5 г сернокислого кальция прибавляют 75 мл дистиллированной воды и перемешивают в ступке или колбе до образования однородной массы. На пластинку 9 х 12 см наносят 10 г сорбционной массы на пластинку 13 х 18 см - 20 г и покачивая равномерно распределяют по всей пластинке. Пластинки сушат при комнатной температуре 18 - 20 часов можно сушить их 20 минут при комнатной температуре а затем 45 минут в сушильном шкафу при температуре 110°С. б 35 г силикагеля КСК просеянного через сито 100 меш смешивают с 2 г сернокислого кальция и 90 мл дистиллированной воды и перемешивают в ступке или колбе до однородной массы. Наносят на пластинки и сушат как указано выше. Порция расчитана на 10 пластинок. Если пластинки с тонким слоем силикагеля темнеют после облучения УФ-светом силикагель перед употреблением следует очистить от примесей. Для этого силикагель заливают на 18 - 20 часов разбавленной соляной кислотой 1:1 кислоту сливают промывают силикагель водой и кипятят в круглодонной колбе 2 - 3 часа с разбавленной азотной кислотой 1:1 промывают проточной водопроводной затем дистиллированной водой до нейтральной реакции промывных вод сушат в сушильном шкафу 4 - 6 часов при температуре 130°. Силикагель дробят и просеивают через сито 100 меш. Пластинки для хроматографии "Силуфол" UV-254 производства ЧССР перед использованием импрегнируют о-толидином. Для этого каждую пластинку опускают на 0 5 см в 0 1% раствор о-толидина в ацетоне налитый в камеру для хроматографирования. После того как фронт растворителя поднимется до верхнего края пластинки ее вынимают и высушивают на воздухе избегая прямого солнечного света. После этого пластинки готовы к употреблению. Пластинки импрегнированные о-толидином хранят в эксикаторе. Используют при анализе кормов. Пластинки "Силуфол" UV-254 производства ЧССР предварительно промывают дистиллированной водой в хроматографической камере высушивают на воздухе и непосредственно перед использованием активизируют в сушильном шкафу при температуре 65° в течение 4 минут. Подготовка хроматографических колонок для очистки экстрактов Хроматографическая колонка для очистки от молочного жира. В нижнюю часть хроматографической колонки размером 20 x 400 мм помещают стекловату или 500 мг обезжиренной ваты. Затем засыпают в колонку силикагель АСК 75 мл для очистки экстрактов из проб свиного жира и 70 мл для всех остальных проб и уплотняют силикагелъ постукиванием по колонке. Колонку промывают 50 мл н-гексана или петролейного эфира и прошедший через нее растворитель отбрасывают. После этого колонка готова для хроматографической очистки экстрактов из проб рыбы мяса и мясопродуктов молока и молокопродуктов меда яиц и т.д. Хроматографическая колонка для очистки экстрактов из проб шротов необогащенных липидами и лузги. Хроматографическую колонку заполняют на высоту 1 см стеклянной ватой затем в колонку вносят просеянную окись алюминия I слоем 2 5 см или окись кремния - 3 5 см. Далее засыпают не утрамбовывая комочки окиси алюминия кремния пропитанные серной кислотой высота слоя II 2 5 см. Каждый слой последовательно промывают гексаном всего 20 - 30 мл . Для анализа жмыхов и шротов обогащенных липидами слои окиси алюминия следует увеличить до 5 см I и 3 см II соответственно в случае использования окиси кремния - 6 см I и 3 см II . 2.5. Проведение определения Вода вино. 200 мл пробы помещают в делительную воронку и экстрагируют пестициды встряхивая в течение 3-х минут н-гексаном или петролейным эфиром тремя порциями по 30 мл или диэтиловым эфиром тремя порциями по 50 мл. В объединенные экстракты насыпают 10 г безводного сернокислого натрия или фильтруют через воронку заполненную на 2/3 сернокислым натрием. Экстракты переносят в прибор для отгонки растворителей и отгоняют растворитель до объема 0 2 - 0 3 мл. В случае необходимости экстракт чистят серной кислотой. Овощи фрукты. 20 г измельченной пробы помещают в колбу с притертой пробкой и проводят экстрагирование пестицидов трижды в течение 15 минут на аппарате для встряхивания н-гексаном или петролейным эфиром порциями по 30 мл. Объединенные экстракты сушат безводным сернокислым натрием переносят в прибор для отгонки растворителей отгоняют растворитель до объема 0 2 - 0 3 мл и наносят на пластинку. Зерно грибы. Из измельченных проб отбирают 20 г зерна 50 г сырых или 10 г сухих грибов и помещают в колбы с притертыми пробками. Экстракцию пестицидов проводят трижды на приборе для встряхивания н-гексаном или петрилейным эфиром порциями по 30 мл. Объединенные экстракты переносят в делительную воронку прибавляют 10 мл насыщенного раствора безводного сернокислого натрия в серной кислоте и осторожно встряхивают несколько раз. Отделяют органический слой и повторяют обработку до тех пор пока кислота не станет бесцветной. Экстракт промывают дистиллированной водой сушат безводным сернокислым натрием и отгоняют растворитель. Яблоки капуста трава сено. 20 г измельченных яблок 20 г капусты 40 г травы и 20 г сена заливают 100 мл ацетона в колбе с притертой пробкой. Встряхивают 2 - 3 минуты прибавляют 20 мл дистиллированной воды и охлаждают на льду 30 минут. Экстракт сливают и фильтруют холодным экстракцию повторяют. Из объединенных водно-ацетоновых экстрактов отгоняют ацетон а из водного остатка экстрагируют препараты н-гексаном тремя порциями по 10 мл в течение 10 минут. Гексановые экстракты очищают серной кислотой насыщенной безводным сернокислым натрием. Сушат безводным сернокислым натрием. Отгоняют растворитель до небольшого объема и наносят на пластинку. Если очистка неполная после испарения растворителей на колбе остается белый налет экстракт испаряют досуха остаток смывают холодным ацетоном 3 раза порциями по 0 2 мл и сразу наносят на пластинку. Комбикорма. Для исследования берут навеску 40 г увлажняют ее в колбе 60 мл дистиллированной воды. Увлажненную навеску оставляют на ночь в колбе закрытой пробкой. Экстракцию пестицидов проводят дважды 50 - 100 мл смеси гексан-ацетон 1:1 при встряхивании в течение 2 часов. Экстракты объединяют в делительной воронке на 500 мл прибавляют дважды по 50 мл дистиллированной воды и после разделения слоев нижний водный слой сливают в другую делительную воронку и экстрагируют пестициды 40 мл гексана. Водный слой сливают. Гексановые экстракты объединяют фильтруют через воронку с бумажным фильтром заполненным на 2/3 безводным сернокислым натрием. Экстракты упаривают на ротационном испарителе до объема 20 - 30 мл или досуха растворяя затем сухой остаток в 20 - 30 мл гексана или петролейного эфира. Экстракт переносят в делительную воронку и производят очистку серной кислотой как описано выше. Шрот лузга жмых. Навески: 15 г обогащенного липидами шрота или жмыха; 20 г не обогащенного липидами шрота или лузги делят на равные части и помещают в колбы емкостью 100 - 250 мл с притертыми пробками заливают гексаном три объема гексана на одну весовую часть шрота встряхивают на приборе для встряхивания 30 минут. Экстракт фильтруют через воронку Бюхнера не перенося осадок на воронку. В колбу повторно заливают указанное количество гексана стряхивают 30 минут фильтруют количественно переносят осадок на воронку Бюхнера с помощью 30 мл гексана 3 раза по 10 мл . Полученный экстракт выпаривают до 30 мл на ротационном испарителе или в токе воздуха при температуре не выше 40° остаток делят на две равные части и помещают в морозильную камеру холодильника на 1 час не менее . Каждую часть пропускают через отдельную колонку с окисью алюминия со скоростью 2 мл/минуту промывают колбу и колонку 50 мл охлажденной смеси этилового эфира с гексаном 15:85 . Эту операцию необходимо проводить без перерыва не оставляя на следующий день. Очищенные экстракты объединяют и упаривают до объема 1 мл. Остаток из колбы переносят количественно микропипеткой с помощью резиновой груши в пробирку на 1 мл колбу и микропипетку 2 - 3 раза промывают небольшим количеством гексана всего 0 3 - 0 5 мл сливая его в ту же пробирку. Затем осторожно выпаривают гексан из пробирки на водяной бане при температуре 50° почти досуха конечный объем приблизительно 2 - 3 капли . Если общий объем экстракта и промывной жидкости превышает 1 мл то сначала выпаривают экстракт постепенно прибавляя к нему промывную жидкость. При наличии в упаренном экстракте белого мазеобразного осадка в пробирку добавляют 5 - 6 капель гексана и помещают ее на 15 - 20 минут в морозильную камеру холодильника затем деканируют дважды таким же количеством гексана и снова упаривают до конечного объема 2 - 3 капли. Параллельно с исследуемыми образцами готовят два модельных экстракта. Каждый экстракт получают из одного грамма шрота не содержащего пестицидов соотношение сухого вещества и пестицида те же что и в исследуемых образцах . В один из экстрактов перед очисткой на колонках вносят микрошприцом микропипеткой определяемые пестициды в количестве 3 мкг в другой - 0 75 мкг. Упаренные исследуемые и модельные экстракты с помощью микропипетки или микрошприца количественно наносят на пластинку трижды смывая пробирку небольшим количеством гексана. Рыба мясо и мясопродукты. Мясо мясопродукты пропускают через мясорубку. Рыбу очищают от чешуи внутренних органов и тоже пропускают через мясорубку. 20 г пробы перемешивают с безводным сернокислым натрием и помещают в колбу с притертой пробкой. Пестициды экстрагируют дважды смесью гексан-ацетон или петролейный эфир-ацетон в соотношении 1:1 порциями по 50 мл в течение 1 5 часов при встряхивании. Экстракт фильтруют через воронку с бумажным фильтром заполненным на 2/3 безводным сернокислым натрием затем растворитель отгоняют сухой остаток растворяют в 20 мл н-гексана и вносят его в колонку с силикагелем АСК. После впитывания экстракта в сорбент пестицид элюируют 110 мл смеси бензола с гексаном в соотношении 3:8 порциями по 25 - 30 мл. Элюат собирают в круглодонную колбу со шлифом емкостью 250 - 300 мл. Через 10 минут после впитывания последней порции растворителя сорбент отжимают с помощью груши. Элюат отгоняют до объема 0 1 мл и наносят на хроматографическую пластинку. В том случае если пробы мяса или рыбы содержат большое количество жира после испарения первого экстрагента cмeси ацетона с гексаном и растворения сухого остатка в гексане следует провести очистку гексанового экстракта серной кислотой а затем колоночную очистку как описано выше. Животный жир яйца яичный порошок. Жир измельчают на мясорубке яичный порошок тщательно перемешивают яйца - отделяют желток от белка взвешивают желток и белок а для анализа берут только желток. Конечный результат о содержании хлорорганических пестицидов в яйце приводят на все яйцо. Желток тщательно перемешивают. 25 г подготовленного образца заливают 50 мл ацетона перемешивают и нагревают на горячей водяной бане до закипания растворителя. Колбу охлаждают добавляют в нее 10 мл охлажденного 2% раствора сернокислого натрия перемешивают и охлаждают 45 минут на ледяной бане. Затем сливают ацетоновый слой в круглодоннную колбу через слой обезжиренной ваты. Экстракцию ацетоном с последующим вымораживанием жира повторяют еще два раза. Из объединенных экстрактов отгоняют ацетон на ротационном испарителе или в приборе для отгонки растворителей температура бани не более 70°+- 2° и трижды экстрагируют петролейным эфиром порциями 20 10 и 10 мл. Продолжительность первой экстракции 1 час последующих 15 минут. Петролейный эфир переносят в делительную воронку с 40 мл 2% водного раствора сернокислого натрия перемешивают содержимое в течение 2-х минут дают слоям разделиться и водную фазу отбрасывают. Для улучшения разделения слоев можно добавить несколько мл насыщенного раствора сернокислого натрия. Операцию промывки экстракта повторяют еще два раза после чего петролейный эфир сливают в стакан с 20 г безводного сернокислого натрия споласкивают делительную воронку дважды 5 мл петролейного эфира. Подсушеный экстракт количественно переносят в мерный цилиндр на 50 мл и доводят объем раствора петролейным эфиром до 30 мл. Далее наносят 30 мл экстракта в колонку с силикагелем АСК как указано выше. Для проб свиного жира насыпают 75 мл силикагеля АСК для всех остальных проб - 70 мл. Очистку экстрактов проводят как описано для проб мяса. Элюат собирают в круглодонную колбу на 150 мл растворитель упаривают до объема нескольких капель и наносят на хроматографическую пластинку. Мед. 30 г меда смешивают с 3 г безводного сернокислого натрия и трижды экстрагируют пестициды гексаном порциями по 30 мл каждый раз по 15 минут тщательно растирая мед стеклянной палочкой в узком химическом стакане. Экстракты объединяют и отгоняют гексан до объема 30 мл или до меньшего объема далее доводя экстракт до 30 мл гексаном. 30 мл экстракта вносят в хроматографическую колонку с силикагелем АСК и проводят очистку экстракта и испарение растворителя как описано выше. Сахар. Из навески 50 г сахара предварительно растворенного в воде пестициды экстрагируют в делительной воронке на 250 мл н-гексаном. Экстракцию пестицидов проводят трижды по 50 25 и 25 мл растворителя каждый раз встряхивая по 5 минут. Объединенные гексановые экстракты очищают от коэкстрактивных веществ красящие аминокислоты липиды сернокислотным способом. Молоко и молочные продукты. Для подготовки проб можно использовать один из приведенных способов. Первый способ. Сливки сметана молоко и др. цельномолочные продукты. Для анализа берут 20 г сливок и сметаны предварительно разведенных равным объемом дистиллированной воды 50 мл молока кефира и т.п. прибавляют концентрированную серную кислоту 30 - 40 мл до полного почернения пробы. Охлажденный до 10 - 15° раствор переносят в делительную воронку и экстрагируют препараты гексаном 2 раза порциями по 25 мл. Для полного извлечения воронку встряхивают 2 минуты затем оставляют ее на 30 минут до полного разделения слоев. Если образуется эмульсия прибавляют 1 - 2 мл этилового спирта. К объединенным экстрактам в делительной воронке прибавляют 10 мл концентрированной серной кислоты насыщенной сернокислым натрием и осторожно встряхивают несколько раз. Очистку продолжают до получения бесцветной серной кислоты. Творог сыр. 50 г творога или 10 г измельченного на терке сыра заливают 40 мл гексана или петролейного эфира непрерывно всряхивают 2 - 3 минуты и оставляют на 30 минут. Экстракцию повторяют. Объединенные экстракты в делительной воронке очищают серной кислотой как указано выше. Второй способ. Молоко кефир простокваша кумыс и другие цельномолочные продукты. 25 мл продукта помещают в делительную воронку на 300 мл приливают по 5 мл щавелевокислого калия и насыщенного раствора хлористого натрия перемешивают приливают 100 мл ацетона встряхивают 2 минуты. Приливают 100 мл хлороформа и встряхивают 2 мин. Воронку оставляют до полного разделения слоев. Верхнюю фазу отбрасывают а нижнюю выливают в круглодонную колбу со шлифом и испаряют растворитель досуха. Остаток смывают 30 мл гексана. Сгущенное молоко 10 - 20% сливки. К 10 г продукта прибавляют 10 мл насыщенного раствора хлористого натрия и выливают в делительную воронку вместимостью 150 мл. К смеси приливают 40 мл ацетона встряхивают 2 минуты приливают 60 мл хлороформа встряхивают 2 - 3 минуты и оставляют до разделения фаз. Далее поступают как при определении пестицидов в молоке. Сгущенные молочные продукты. 10 г продукта помещают в стаканчик заливают 10 мл вода с температурой 45 - 50°С перемешивают и переносят в делительную воронку на 150 мл добавляют 5 мл щавелево-кислого калия. Содержимое воронки перемешивают приливают 80 мл ацетона и встряхивают 2 - 3 минуты. Добавляют 100 мл хлороформа и встряхивают 5 - 7 минут. После разделения фаз нижнюю фазу сливают в круглодонную колбу растворители отгоняют а сухой остаток растворяют в 30 мл петролейного эфира. Сухие молочные продукты. 3 г сухих молочных продуктов сливок 2 г высыпают в стаканчик приливают 15 мл дистиллированной воды с температурой 40 - 45°С размешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 300 мл приливают по 5 мл щавелевокислого калия и насыщенного раствора хлористого натрия. Содержимое воронки перемешивают добавляют 80 мл ацетона и встряхивают 3 - 5 минут приливают 100 мл хлороформа встряхивают 5 минут и оставляют на 3 - 5 минут до разделения фаз . Нижнюю фазу сливают в круглодонную колбу растворитель отгоняют а остаток смывают 30 мл гексана. Сметана 30 - 40% сливки. 5 г продукта отвешивают в стаканчик приливают 10 мл насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку вместимостью 150 мл. Стаканчик обмывают 40 мл ацетона смывы переносят в делительную воронку которую встряхивают 2 - 3 минуты добавляют 70 мл хлороформа и встряхивают 2 мин. Воронку оставляют на несколько минут до разделения фаз нижнюю фазу сливают в колбу для отгонки растворителей растворитель отгоняют а остаток смывают 30 мл гексана. Творог сыр. 10 г творога или измельченного на терке сыра растирают с 10 мл насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку на 250 - 300 мл. Прибавляют 80 мл ацетона встряхивают 2 минуты приливают 100 мл хлороформа и вновь встряхивают. Нижнюю фазу используют для анализа после отгонки растворителей растворив остаток в 30 мл гексана. Далее проводят очистку экстрактов из проб молока и молочных продуктов от молочного жира подготовленных по второму способу. Для этого 30 мл экстракта наносят в колонку с 70 мл силикагеля АСК. После впитывания экстракта в сорбент пестицид элюируют 110 мл смеси бензола с гексаном в соотношении 3:8 порциями по 25 - 30 мл. Элюат собирают в круглодонную колбу на 250 - 300 мл. Через 10 минут после впитывания последней порции растворителя сорбент отжимают с помощью резиновой груши. После очистки растворители отгоняют под вакуумом. Сливочное масло. 20 г сливочного масла растапливают на водяной бане в круглодонной колбе прибавляют 50 мл ацетона тщательно перемешивают до растворения жира прибавляют 10 мл ледяной дистиллированной воды и охлаждают на льду до затвердевания жира примерно 30 минут . Сливают ацетоновый экстракт и процедуру повторяют еще 2 раза. Из объединенных экстрактов в круглодонной колбе ацетон отгоняют на водяной бане. Пестициды экстрагируют из оставшегося водного экстракта гексаном тремя порциями по 10 мл в течение 5 минут. Объединенные гексановые экстракты в делительной воронке обрабатывают серной кислотой с сернокислым натрием. Очищенный экстракт сушат безводным сернокислым натрием и упаривают. Почва. К навескам воздушно-сухой почвы 10 г помещенным в конические колбы емкостью 250 мл приливают 10 мл 1%-ного водного раствора хлористого аммония и оставляют на сутки закрытыми. Затем приливают смесь 30 мл ацетона и 30 мл гексана и встряхивают колбы в течение часа на встряхивающем устройстве. Содержимое колб переносят в центрифужные пробирки. После центрифугирования жидкую часть сливают в конические колбы почву с помощью 10 мл 1%-ного раствора хлористого аммония и 30 мл ацетона переносят в исходные конические колбы добавляют 30 мл гексана и проводят экстракцию еще в течение 30 минут. Затем экстракты объединяют. К объединенным экстрактам в делительной воронке приливают 180 мл дистиллированной воды осторожно встряхивают в течение 5 - 7 минут дают жидкостям расслоится и нижний водный слой сливают в коническую колбу. Гексановый слой пропускают через безводный сульфат натрия столовая ложка или 30 - 40 г сульфата натрия . Из водно-ацетонового слоя экстракцию пестицидов проводят еще дважды 15 и 10 мл гексана который затем сушат через тот же сульфат натрия. Гексановые экстракты объединяют. Концентрирование экстрактов проводят либо на ротационно-вакуумном испарителе либо при температуре бани не более 40°С и времени отгонки 9 - 11 минут либо из колбочек с г-образным отводом при температуре водяной бани 72 - 75°С. Очистку сконцентрированных гексановых экстрактов из проб почв проводят серной кислотой как описано выше для других проб и испаряют растворитель. Табак и табачные изделия. 5 г табака помещают в стеклянный стакан на 500 мл заливают 50 мл концентрированной серной кислоты и стеклянной палочкой тщательно размешивают до полного равномерного обугливания пробы. Спустя 10 - 15 минут в колбу добавляют 25 мл гексана тщательно размешивают содержимое и прибавляют 20 мл четыреххлористого углерода. Экстракцию пестицидов из пробы проводят в течение 15 минут трижды после чего экстракт последовательно переносят в делительную воронку для однократной или двукратной дополнительной очистки серной кислотой. Хроматографирование На хроматографическую пластинку на расстоянии 1 5 см от ее края шприцем или пипеткой наносят исследуемую пробу в одну точку так чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Остаток экстракта в колбочке смывают тремя порциями по 0 2 мл диэтилового эфира которые наносят в центр первого пятна. Справа и слева от пробы на расстоянии 2 см наносят стандартные растворы содержащие 10 5 1 мкг исследуемых препаратов или другие количества близкие к определяемым концентрациям . Пластинки с нанесенными растворами помещают в камеру для хроматографирования на дно которой за 30 минут до начала хроматографирования наливают подвижный растворитель. При использовании пластинок с тонким слоем окиси алюминия или силикагеля в качестве подвижного растворителя применяют н-гексан или смесь гексана с ацетоном в соотношении 6:1 для препаратов у которых величина R f в гексане ниже 0 3. При использовании пластинок "Силуфол" подвижный растворитель - 1% раствор ацетона в гексане а пластинок "Силуфол" - импрегнированных о-толидином - гексан с диэтиловым эфиром в соотношении 49:1. Край пластинки с нанесенными растворами может быть погружен в подвижный растворитель не более чем на 0 5 см. После того как фронт растворителя поднимется на 10 см пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут для испарения растворителя. Далее пластинку орошают проявляющим реактивом и подвергают действию УФ света в течение 10 - 15 минут лампа ПРК-4 . Пластинки следует располагать на расстоянии 20 см от источника света. При наличии хлорорганических пестицидов на пластинке появляются пятна серо-черного цвета. При использовании для анализа пластинок "Силуфол" импрегнированных о-толидином их непосредственно после хроматографирования подвергают УФ-облучению в течение нескольких минут. При наличии хлорорганических пестицидов в этом случае появляются пятна сине-голубого цвета. Количественное определение осуществляют сравнением площадей пятен пробы и стандартных растворов. Между количеством препарата в пробе не превышающем 20 мкг и площадью его пятна на пластинке существует прямая пропорциональная зависимость. При большем содержании препарата следует использовать пропорциональную часть исследуемого экстракта. 2.6. Обработка результатов анализа Количество препарата в пробе вычисляют по формуле: А S 2 Х = - -- P S 1 где X - содержание препарата в пробе мг/кг или мг/л A - содержание препарата в стандартном растворе мкг S - площадь пятна стандартного раствора мм2 1 S - площадь пятна пробы мм2 2 Р - масса или объем исследуемой пробы г или мл 3. Требования безопасности Соблюдаются требования безопасности обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами и хлорорганическими пестицидами. Таблица 3. Величина R f хлорорганических пестицидов ----------------------T--------------------------T----------------------- Пестицид ¦ Подвижный растворитель ¦ Величина R f ¦ +----------------------- ¦ ¦ на окиси на ¦ ¦ алюминия силикагеле ----------------------+--------------------------+----------------------- Гексахлорбензол Гексан 0 9 - Альдрин Гексан 0 83 0 68 ДДЭ -"- 0 78 0 66 ДДЭ Гексан + ацетон 6:1 0 87 - Гептахлор Гексан 0 76 0 65 2 4-ДДТ - " - 0 67 0 54 4 4'-ДДТ - " - 0 61 0 50 4 4'-ДДТ Гексан + ацетон 6:1 0 75 - Линдан Гексан 0 34 0 20 ДДД - " - 0 30 0 40 ДДД Гексан + ацетон 6:1 0 62 - Метоксихлор Гексан 0 15 - Метоксихлор Гексан + ацетон 6:1 0 60 - Кельтан Гексан 0 05 - Кельтан Гексан + ацетон 6:1 0 40 - Кельтан Бензол 0 44 - Тедион Гексан 0 03 - Тедион Гексан + ацетон 6:1 0 55 - Эфирсульфонат Гексан 0 - Эфирсульфонат Гексан + ацетон 6:1 0 45 - Дактал То же 2:1 0 9 - Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР А.И. Заиченко